期刊简介
本杂志是由中华人民共和国卫生主管，同济医科大学附属协和医院主办，国内外公开发行的学术性期刊，1996年被评为全国优秀期刊。辟有专家论坛、临床研究、实验研究、技术与方法、研究报告、综述、进修苑、学术争鸣、经验介绍及病例报告等多个栏目。
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首页>临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
- 杂志名称：临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院
- 国际刊号：1001-1781
- 国内刊号：42-1764/R
- 出版周期：半月刊
期刊荣誉：第二届国家期刊奖提名奖期刊收录：万方收录(中), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 文摘与引文数据库, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
小鼠GATA-3基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴别
李玉晓；何晓光；姚永刚；王雨
关键词：鼻炎, 变应性, RNA干扰, GATA-3, 慢病毒载体, 小鼠
摘要：目的:探索干扰小鼠GATA-3基因的慢病毒载体的构建与鉴别方法.方法:分析小鼠单个核细胞内GATA-3基因的编码区,设计并合成3条佳动力学参数靶点干扰序列的单链oligo.利用PCR技术对合成的单链oligo进行拼接反应,将合成好的序列装入shRNA慢病毒载体并转化至感受态细胞DH5α,测序并鉴定重组克隆中的基因序列后构建shRNA-GATA-3表达载体.根据不同的干扰序列将慢病毒载体分为4组:siRNA-685(LV3-GATA-3-Mus-685)组、siRNA-1152(LV3-GATA-3-Mus-1152)组、siRNA-1615(LV3-GATA-3-Mus-1615)组和对照组.将shRNA载体分别与表达载体共转染入293T细胞,通过qPCR检测筛选出优干扰序列.将筛选到佳的LV3-GATA-3-Mus-1615干扰序列构建入慢病毒载体,用构建的慢病毒干扰载体和包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度.结果:克隆测序验证无误,慢病毒载体构建成功.siRNA-1615组GATe3 mRNA相对表达量(0.004)与siRNA-685组(0.009)、siRNA-1152组(0.009)和对照组(0.022)相比明显减少,LV3-GATA-3-Mus-1615为佳的干扰序列.收集的病毒上清测定病毒的滴度为5×108 TU/ml.转染实验48 h后,荧光显微镜观察转染成功.结论:成功构建并鉴定小鼠GATA-3基因RNAi慢病毒载体.
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