期刊简介
本杂志是由中华人民共和国卫生主管，同济医科大学附属协和医院主办，国内外公开发行的学术性期刊，1996年被评为全国优秀期刊。辟有专家论坛、临床研究、实验研究、技术与方法、研究报告、综述、进修苑、学术争鸣、经验介绍及病例报告等多个栏目。
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首页>临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
- 杂志名称：临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院
- 国际刊号：1001-1781
- 国内刊号：42-1764/R
- 出版周期：半月刊
期刊荣誉：第二届国家期刊奖提名奖期刊收录：万方收录(中), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 文摘与引文数据库, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
人三叶因子3shRNA表达质粒的构建及有效序列筛选
吴靖芳；王冬梅；薛刚；陈亚敏；张文静；张静；李少瑛
关键词：三叶因子3, 慢病毒载体, shRNA, 瞬时转染
摘要：目的:三叶因子3(trefoil factor 3,TFF3)除具有黏膜保护作用外还与恶性肿瘤的形成、生长、转移有关.本研究通过慢病毒表达质粒介导shRNA,瞬时转染自身表达TFF3的甲状腺乳头状癌K1细胞,筛选出了靶向人TFF3的有效的siRNA序列.方法:分别在人TFF3基因mRNA的132、170、258和537 bp处作为潜在靶位点,合成4条siRNA转录模板的发夹结构(shRN A1～4)以及1条阴性对照(shRNAC),体外退火后插入pLVX-shRNA-puro构建重组质粒,酶切鉴定,并测序.瞬时转染K1细胞、Real-time PCR及western-blot等检测TFF3 mRNA和蛋白在转染细胞的表达.结果:shRNA 1～2两条发夹结构序列有基因突变,shRNA 3～4对K1细胞TFF3表达有不同程度的抑制效应(P＜0.01).其中shRNA3 (TFF3 258～276)表现出了高的沉默效率(转染效率76.83％时,mRNA水平的沉默效率达60.67％;蛋白质水平的沉默效率达56.44％,均P＜0.01).结论:成功构建了pLVX-shRNA-puro-TFF3慢病毒质粒,并筛选出了有效的序列,为进一步研究TFF3的功能奠定了基础.
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