期刊简介
本杂志是由中华人民共和国卫生主管，同济医科大学附属协和医院主办，国内外公开发行的学术性期刊，1996年被评为全国优秀期刊。辟有专家论坛、临床研究、实验研究、技术与方法、研究报告、综述、进修苑、学术争鸣、经验介绍及病例报告等多个栏目。
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首页>临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
- 杂志名称：临床耳鼻咽喉头颈外科杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院
- 国际刊号：1001-1781
- 国内刊号：42-1764/R
- 出版周期：半月刊
期刊荣誉：第二届国家期刊奖提名奖期刊收录：万方收录(中), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CA 化学文摘(美), 文摘与引文数据库, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
大鼠Atohl真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP的构建及转染293T细胞的研究
郑国玺；朱珠；祝康；侯瑾；韦俊荣；许珉
关键词：听觉丧失, 感音神经性, Atohl, 基因克隆, 真核表达载体
摘要：目的:利用基因工程方法克隆SD大鼠Atohl基因编码区序列,构建Atohl的真核表达载体pA-tohl-IRES2-EGFP,并验证其在293T细胞中的表达.方法:通过RT-PCR从SD大鼠结肠组织内扩增出Atohl基因全长CDS序列,并TA克隆于PMD-19T载体中.纯化回收的目的片段测序后连接于真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,构建pAtohl-IRES2-EGFP真核表达载体.再次测序后脂质体介导重组质粒转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.结果:测序后将扩增得到的大鼠Atohl CDS序列与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性,突变为无义突变,不影响蛋白表达.双酶切和测序结果证明Atohl已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,重组质粒转染293T细胞24 h后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达.结论:获得正确Atohl编码序列,真核表达载体pAtohl-IRES2-EGFP构建成功并可以在293T细胞中表达,为进一步对感音神经性聋的基因治疗奠定了基础.
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